葫芦科植物幼嫩子房壁制片技术的优化及其染色体倍性鉴定

该研究利用黄瓜、甜瓜、西瓜和西印度黄瓜这几种葫芦科植物的幼嫩子房壁作为材料进行染色体制片,探索子房材料的样品大小、预处理时间和酶解时间对染色体制片的影响及其优化,并用该制片方法对黄瓜候选单倍体植株的子房壁进行倍性鉴定和荧光原位杂交实验。结果发现:(1)黄瓜、甜瓜、西瓜和西印度黄瓜的幼嫩子房壁最佳预处理时间分别为1 h 30 min、1 h、55 min和45 min,子房长度为0.2～1 cm,子房壁材料切成边长为1～1.5 mm小块,酶解时间为1 h 10 min～1 h 20 min时,用该优化制片方法均可观察到较多的分裂相。(2)利用该方法鉴定结果显示,葫芦科植物黄瓜、甜瓜、西瓜和西印度黄瓜的染色体分别为14、24、22和24条,黄瓜候选单倍体植株的体细胞染色体数为7条。(3)将该制片方法获得的染色体装片用于荧光原位杂交结果显示,在二倍体黄瓜染色体中有3对明亮的45S rDNA杂交信号和1对5S rDNA杂交信号,而单倍体黄瓜中相应信号数量均减半;在甜瓜、西瓜和西印度黄瓜中均有2对45S rDNA杂交信号和1对5S rDNA杂交信号。研究认为,利用葫芦科植物子房壁作为制片材料,不仅可以获得良好的分裂相,还具有易于取材、制片效率高等优点,因此子房壁制片法是研究植物染色体数目和鉴定倍性的有效方法,且该制片方法也适用于进一步的荧光原位杂交分析。     

淫羊藿苷对RSV感染诱发哮喘小鼠体内PGD2水平的影响

摘要 目的：观察淫羊藿苷对RSV感染诱发哮喘小鼠血清及支气管肺泡灌洗液中前列腺素D2（Prostaglandin D2,PGD2）表达水平的影响,以期为哮喘治疗寻找新的靶点。方法：30只Balb/c小鼠随机均分为三组：即正常组,OVA/RSV-YYH组（即淫羊藿苷治疗组）及OVA/RSV-非YYH组（即未经淫羊藿苷治疗组）。卵蛋白致敏RSV感染诱发小鼠哮喘模型成功建立后,予以淫羊藿苷2.5 mg连续腹腔注射治疗2周,比较治疗前后肺功能检测结果、支气管肺泡灌洗液（bronchoalveolar lavage fluid,BALF）中细胞分类计数、血清及BALF中PGD2表达水平、肺组织病理学变化。结果：淫羊藿苷治疗后,哮喘小鼠肺功能较治疗前明显改善,差异有统计学意义（P<0.05）;PGD2水平较前明显下降,差异有统计学意义（P<0.05）;各分类白细胞计数较前明显减少,差异有统计学意义（P<0.01）,气道管壁增厚及管腔狭窄现象较前明显改善,肺组织炎症细胞浸润较前减少。结论：淫羊藿苷可有效降低RSV感染诱发哮喘小鼠体内炎性介质PGD2水平,从而改善气道重塑,减轻小鼠的哮喘症状,它可能是以后哮喘治疗的一个新的靶点。     

细胞粘附分子P-selectin功能片段在CHO细胞表面的锚定表达

为了筛选出针对细胞粘附分子P-selectin的特异性抗体, 克隆了P-selectin功能性基因片段, 使其通过糖基化磷脂酰肌醇(GPI)锚定表达于真核细胞的细胞膜上, 以用作筛选的抗原。提取人血小板的总RNA, RT-PCR扩增出P-selectin目的基因片段, 同时用重叠延伸PCR的方法合成细胞膜锚定信号肽GPI基因; 将二者按上下游顺序插入含有弱化neo基因的真核表达载体pMCEw2中; 并将构建的重组质粒pMCEw2-GPI-P-selectin转染CHOdhfr-细胞, G418筛选获得阳性细胞株, 利用ELISA、免疫印迹和免疫荧光法检测P-selectin的表达。实验证实了P-selectin在细胞膜上获得稳定表达。为进一步进行抗P-selectin的特异性抗体的筛选提供了必要前提。     

拟南芥短肽激素PROPEP基因家族在根生长中的作用机理

AtPROPEP是拟南芥(Arabidopsis thaliana)具有7个成员的基因家族, 编码内源短肽激素。AtPROPEP基因家族编码的蛋白质C端23个氨基酸短肽能够被2个同源激酶受体AtPEPR1和AtPEPR2识别并结合, 引起下游反应。然而, 对于该家族成员AtPROPEP2,3−6的表达对茉莉酸(JA)和水杨酸(SA)的响应以及在根生长中的作用并不清楚。GUS染色和定量RT-PCR分析结果表明, AtPROPEP2–6的表达对于JA和SA的响应不同, 暗示着它们可能通过不同的方式参与植物的先天免疫反应。AtPROPEP3和AtPROPEP4过表达植株的表型分析表明, AtPROPEP3和AtPROPEP4促进拟南芥根的生长。     

优化培养条件和裂解方法提高hRANKL在大肠杆菌内的表达

RANKL/RANK/OPG轴在骨代谢过程中起到中心调节作用,也是近年来骨相关疾病治疗研究的热点之一。RANKL蛋白在RANKL/RANK/OPG轴信号传递过程中起到关键作用,在骨代谢相关实验研究中用途广泛。但是,使用大肠杆菌Escherichia coli可溶表达重组人源RANKL蛋白 (hRANKL) 时产量远低于鼠源RANKL (mRANKL)。本研究通过将LB培养基pH值调整并稳定在7.5、降低诱导表达温度至16 ℃并优化细菌裂解条件,成功地将可溶hRANKL产量增加到了对照组的5?12倍。该方法有效提高了hRANKL在大肠杆菌中可溶表达的产量,同时也是研究重组蛋白在大肠杆菌内的可溶表达策略的有益尝试。     

牦牛SND1基因特征序列分析及其蛋白在乳腺的表达

Staphylococcal nuclease and tudor domain containing 1（ SND1,Tudor-SN）是一种参与基因调控的转录共激活因子蛋白,本研究意在克隆牦牛泌乳相关基因SND1,分析其生物特性,研究其蛋白在乳腺的表达。采集牦牛泌乳期乳腺组织,胰蛋白酶消化法得到原代乳腺上皮细胞,纯化到3代, 采用RT-PCR扩增克隆SND1基因,测序并拼接,并用相关生物信息软件分析牦牛SND1基因特性;用免疫组织化学和免疫荧光技术对牦牛SND1基因编码蛋白进行定位分析。获得如下结果：牦牛SND1基因全序列为3294 bp,含有2733 bp的ORF,共包含20种氨基酸。SND1基因编码蛋白为非分泌蛋白,非跨膜蛋白;同源性分析显示,牦牛SND1基因与野牛、家牛、藏羚羊、山羊、猪、野骆驼、马、黑猩猩、人、褐家鼠的同源性分别为99%、98%、96%、94%、91%、90%、90%、89%、89%、85%;系统进化树表明与野牛和家牛的进化水平较近,与人和鼠的进化水平较远。免疫组织化学染色结果显示,SND1蛋白在分泌上皮细胞（乳腺上皮细胞）和导管上皮细胞呈阳性高表达,在肌上皮细胞呈弱表达。免疫荧光显示,SND1蛋白在乳腺上皮细胞胞核高表达,胞质弱表达。上述研究结果为进一步探究SND1对牦牛泌乳机能的调节提供了相关依据,也为高寒哺乳动物的研究提供了参考资料。     

优雅蝈螽水溶性和类膜结合型海藻糖酶编码cDNA的鉴定及其在体内的表达

海藻糖酶是一种二糖水解酶,催化海藻糖转换为葡萄糖,为昆虫包括发育、壳多糖合成及飞翔代谢在内的多种生理过程所必需。尽管某些昆虫的海藻糖酶基因已被鉴定,但优雅蝈螽的海藻糖酶编码序列尚未见报告。本研究采用RACE结合多重PCR技术,分离鉴定优雅蝈螽的水溶性海藻糖酶（GgTre1）和类膜结合型海藻糖酶（GgTre2-like）的全长编码序列（cDNA）,包括携带不同长度3′-非翻译区（3′-UTR）的3个GgTre1 cDNA 亚型（GenBank：No.KY400001-KY400003）和3个GgTre2-like cDNA 亚型（GenBank：No.KY400004-KY400006）。 3个GgTre1 cDNA序列分别为2 107,2 021和1 914 bp,具有相同长度的5′-UTR（33 bp）,但3′-UTR 长度不同,分别为322,248和129 bp。GgTre1-2 cDNA含1 740 bp,编码579 个氨基酸残基组成的多肽链,分子量为67.29 kD;与之不同,根据cDNA演绎的GgTre1-1和GgTre1-3序列较GgTre1-2多4个氨基酸残基,多肽链的分子量为67.88 kD。3个GgTre2-like cDNA（GgTre2-like-1,-2和-3）序列全长分别为2 491,2 460 和2 381 bp。5′-UTR 均为284 bp,3′-UTR 分别为398,367和285 bp。GgTre2-like cDNA开阅读框为1 809 bp,编码602 氨基酸残基组成的多肽链,分子量为67.88 kD。实时定量PCR, 分析GgTre1和GgTre2-like基因在雌、雄个体（各20个）的组织特异性表达。结果显示,GgTre1 在卵巢和附腺表达量最高;GgTre2-like 主要在卵巢表达,在雄性肌肉和马氏管的表达量高于其他组织。上述结果表明,本研究从优雅蝈螽分离到3′-UTR长度不同的3个水溶性和3个类膜结合型海藻糖酶cDNA序列。结果还提示,GgTre1 在各组织的表达差异较大,而GgTre2-like 在各组织的表达相对稳定。不同长度3′-UTR的GgTre1 和 GgTre2-like 亚型的存在,以及不同长度的3′-UTR在翻译过程中的特殊作用,尚待今后研究证实。     

恒河猴感染SARS病毒致病模型的建立

为建立恒河猴严重急性呼吸道综合征(SARS)的模型并对其致病特点进行观察,采用病毒分离、免疫荧光、光镜及RT-PCR方法对病毒感染组和非感染组恒河猴不同时间、不同组织或分泌物进行检测.结果显示从恒河猴不同组织中分离到病毒,而且在病毒感染后第2d和第5d的血液、第7、9d的鼻咽分泌物、第3d的粪、第5d的粪尿中均检测到SARS-CoV RNA.光镜观察到病毒感染组肺组织肺泡间隔增宽,有大量淋巴细胞、单核细胞浸润,肺泡腔有渗出,甚至形成透明膜样物;多个肺泡形成机化性肺炎的表现.感染组肝组织可见较大的坏死灶,并伴有大量炎性细胞浸润.结论认为已成功建立了恒河猴SARS模型,可用于评价抗SARS药物和疫苗的研究.     

馆藏珍品 现代黄种人的祖先——柳江人

1958年9月24日,广西壮族自治区柳江县新兴农场(当时为劳改农场)一个分队的服刑人员在农场附近寻找肥泥,有人提出挖掘当地人称为通天洞中的堆积土作肥料。服刑人员高举火把,把通天洞照得通亮,他们一连挖了几天,几乎把洞里的沉积土挖下三米深,挑出来放在地里作肥料。他们挖着挖着,在离洞口18米处偶然发现一个完整的人头骨化石(缺下颌骨)。农场场长李殿得知后非常重视,即下令将化石装箱妥善保护,并向有关科研部门做了报告,中国科学院古脊椎动物与古人类研究所     

狗中缝大核内微量注射纳洛酮和普鲁卡因对电针抑制内脏牵拉反应的影响

6只狗15次实验结果表明,电针前牵拉胃的反应持续期为39.6±5.74秒,心率的变化率为38.3±4.40%。电针诱导15分钟后,反应持续期和心率的变化率分别减少至3.90±1.17秒和5.87±1.97%(p<0.01)。电针的这种抑制作用在取针后30分钟仍未消失。(4只狗,n=15)微量注射纳洛酮(5μg/5μl/5min)和普鲁卡因(0.01mg/5μl/5min)于中缝大核内对电针抑制内脏牵拉反应(包括恶心、呕吐和内脏痛等)的作用分别可翻转77.68±22.01%和32.58±17.88%。与生理盐水组比较p<0.05。本文对中缝大核及其鸦片系统在针刺抑制内脏牵拉反应中的作用进行了讨论。